親水色譜柱是一種專為分離極性和親水性化合物設計的色譜柱，在生物化學、藥物研發等領域應用廣泛。其核心在于填料表面帶有親水性基團，如酰胺基、二醇基、兩性離子基團等，能夠與水相溶劑產生強相互作用。這種設計使得親水色譜柱適合分離傳統反相色譜難以處理的強極性物質，比如糖類、氨基酸、有機酸、核苷酸等。
親水色譜柱的工作原理基于溶質與填料之間的氫鍵作用、偶極-偶極作用及親水分配機制。流動相多用乙腈-水或甲醇-水體系，常添加甲酸銨、乙酸銨等緩沖鹽調節保留行為。
1、分離原理與選擇性
基于親水作用：親水色譜柱的分離原理主要基于樣品分子與固定相表面的親水相互作用，物質的洗脫順序與反相液相色譜（RPLC）相反，極性強且親水性大的化合物通常被保留的時間更長。
獨t的選擇性：與常規的C18色譜柱等反相色譜柱具有不同的選擇性，對于一些在反相色譜中難以分離或保留較弱的極性化合物、親水性化合物，如有機酸、水溶性維生素、低聚糖、氨基酸、小分子縮氨酸和小分子核苷等，能夠提供更好的分離效果。
2、固定相特性
親水性：固定相具有較強的親水性，通常由含有親水基團的硅膠等材料制成，能夠與極性化合物發生相互作用，實現對這類化合物的有效保留和分離。
適度的表面覆蓋率和封尾：通過合理的設計和處理，固定相具有適度的表面覆蓋率和良好的封尾，減少了非特異性吸附和拖尾現象，提高了峰形的對稱性和分離效果。
3、流動相兼容性
可使用高比例水相：能與100%水流動相條件兼容，在高含水量的流動相中對強極性化合物仍具有較強的保留能力，這與反相色譜中增加水的比例會導致樣品保留減小的特點形成鮮明對比。
流動相組成靈活：典型的HILIC分離條件中，流動相中水的含量通常在3%至40%之間波動，但也可根據具體樣品和分離需求在一定范圍內調整，還可使用乙腈等有機溶劑與水混合形成不同的流動相體系。
4、峰形與檢測優勢
良好的峰形：對酸性、堿性和中性化合物都能提供良好的峰形，有利于準確定量和定性分析。
提高質譜靈敏度：在與質譜聯用時，能夠提高質譜的靈敏度，有助于檢測低濃度的目標分析物，這是因為其流動相組成和分離特性更適合質譜檢測，減少了基質干擾等因素。
5、樣品處理與分析效率
簡化樣品處理：可以直接進樣溶解在有機溶劑中的樣品，無需像一些其他色譜方法那樣進行復雜的樣品前處理，如衍生化等，簡化了操作步驟，提高了分析效率。
承受高流速：由于流動相的低黏度特性，能夠承受更高的流速，從而縮短分析時間，提高分析效率，適用于快速分析和高通量篩選。
6、使用壽命與重現性
較長的使用壽命：在高含水量的流動相中使用時長壽命相對較長，尤其是在合適的操作條件下，能夠保持較好的性能和穩定性。
優良的重現性：具有優良的批與批和色譜柱與色譜柱間的重現性，保證了分析結果的可靠性和可比性。
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